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以褐藻醣膠及三甲基幾丁聚醣組成的奈米顆粒做為 炭疽疫苗佐劑之活體外及活體內研究並與 CpG 比較

為了解決tetanus toxoid中文的問題，作者蔡孟宏 這樣論述：

目錄目錄.....I圖表目錄.......III中文摘要.......VI英文摘要.......VIII壹、緒論.......1貳、材料與方法..18 一、材料.......18 二、方法.......18 1. TMC 的合成......18 2. FITC 偶聯之 trimethylchitosan chloride (TMC) 的合成.....19 3. 正或負電荷 FUC-TMC NPs 形成區域之研究.......19 4. FUC、TMC 與 FUC-TMC NPs 的結構特性判定.....20 5. 細胞培養.....21 6. 細胞生長活性分析 (Cell via

bility asay)......22 7. 細胞毒性分析 (Cytotoxicity asay)...…..23 8. 偵測 JAWS II DCs 攝入 FUC-f-TMC NPs 之螢光顯微圖像拍攝.......24 9. 以流式細胞儀測量 JAWS II DCs 對 FUC-f-TMC NPs 的攝入…........24 10. 以流式細胞儀測量 JAWS II DCs 內表現之細胞激素 (cytokines)....25 11. 炭疽保護性抗原專一性抗體之 IgG抗體效價分析及 IgG1/IgG2a亞型抗體定量分析..26 12. 小鼠免疫及炭疽致死毒素 (letha

l toxin)挑戰試驗....28 13. 統計方法分析.....29參、結果...29 一、FUC-TMC NPs 生成條件之研究.....29 二、FUC-TMC NPs 的結構特性分析.....33 三、細胞生長活性和細胞毒性之分析.....36 四、JAWS II DCs 攝入 FUC-TMC NPs 之量化分析......38 五、細胞激素 (cytokines) 表現之分析.......41 六、免疫小鼠之 anti-PA IgG 及 anti-PA IgG1: IgG2a 分析......45 七、免疫小鼠以炭疽致死毒素進行挑戰試驗之保護力分析.....49肆、討論.....

..50伍、結論.......60參考文獻.......61圖表目錄圖1.經常用來做為藥物傳輸載體材料的天然多醣結構..............7圖2.以電性、羧化和硫酸化做為分類依據的海洋原生多醣..........11圖3.褐藻醣膠的生物活性....................................12圖4.DCs 與 T 細胞間的相互作用關係.........................13圖5.聚電解質複合反應物形成之作用原理.......................16圖6.FUC 與 TMC 在不同質量比下所形成的 FUC-TMC NPs 粒徑、zeta界面電

位、溶液穿透率 以及生成產率之間的對應關係............................31圖7.TMC、FUC、(+)-FUC-TMC NPs 和 (-)-FUC-TMC NPs 的 FT-IR 光譜....34圖8.剛製備好及離心純化後重懸浮的 (+)-FUC-TMC NPs 和(-)-FUC-TMC NPs，剛製備好的 (+)-FUC-TMC NPs+AVA 和(-)-FUC-TMC NPs +AVA 之 TEM 影像....35圖9.以 MTT 試驗法及 LDH 釋放試驗法來評估不同濃度的 FUC、TMC、(+)-FUC-TMC NPs和 (–)-FUC-T

MC NPs 對 JAWS II、A549或 L929 細胞的生長活力及細胞毒性的影響...38圖10.用不同濃度的 (+)-FUC-f-TMC NPs 及 (-)-FUC-f-TMC NPs 與 JAWS II 細胞培養 16小時後，以流式細胞儀測量 JAWS II 細胞攝入的量..............40圖11.與 (+)-FUC-f-TMC NPs 或 (-)-FUC-f-TMC NPs 培養 16 小時後的 JAWS II DCs 螢 光顯微圖像...............................................41圖12.不同濃度之 FUC

和 TMC 誘導 JAWS II DCs 表現細胞激素之分析..........43圖13.(+)-FUC-TMC NPs 和(-)-FUC-TMC NPs 誘導JAWS II DCs表現細胞激素之分析...44圖14.免疫 A/J 小鼠血清中抗炭疽保護性抗原 (PA) 之 IgG 抗體效價分析...........46圖15.免疫 A/J 小鼠血清中炭疽保護性抗原(PA)專一性之IgG1/IgG2a亞型抗體定量分析..47圖16.以炭疽致死毒素攻毒挑戰免疫 A/J 小鼠的動物保護力試驗.....49表1.FUC 與 TMC 在不同質量比下，進行 PEC 反應所形成的奈米粒子粒徑、zeta 電

位、溶液 穿透率以及生成產率之對應表...............32表2.(+)-FUC-TMC NPs 和 (-)-FUC-TMC NPs 儲存在 4oC 下的安定性...........32

抗菌醣分子疫苗之研發

為了解決tetanus toxoid中文的問題，作者廖國翔 這樣論述：

細菌感染導致了威脅生命的疾病，並給公共衛生造成巨大損失，是全世界一個嚴重的問題。醣類為基礎開發出來的抗菌疫苗在今日儼然成為一個有效的且成功的對抗細菌感染療法，尤其細菌莢膜多醣和載體蛋白結合物疫苗的創新發展之後更是有更好的效果。因此，在進行新的以醣類化合物為基礎開發抗菌疫苗開發的工作上，細菌莢膜多醣的鑑定以及重建是這方面疫苗開發的主要目標。肺炎克雷伯氏菌（KP）感染在人體中會引起肺炎和肝膿腫，並且肺炎克雷伯氏菌含有與細胞壁相連的特定莢膜多醣。但是由於炎克雷伯氏菌莢膜多醣的合成極困難，目前仍然沒有可用的抗炎克雷伯氏菌疫苗。此篇論文中我們合成了以肺炎克雷伯氏菌的醣重複單元為基礎的四醣到八醣多醣，並

且結合到到載體蛋白上作為候選疫苗進行小鼠免疫。免疫研究顯示，合成的肺炎克雷伯氏菌相關莢膜多醣疫苗可引發識別所有合成聚醣的抗體，且這些抗體表現出良好殺菌活性。最終結果表明至少要以七醣為最小醣元以取得最佳效果，是為肺炎克雷伯氏菌疫苗開發的潛在候選者。另外，在多種傳染病原體中的生物膜基質裡發現含有以1-6鍵結的聚乙酰基葡萄糖胺多醣（PNAG），適合開發疫苗且已被引入作為疫苗開發的抗原。但是，作為優化疫苗的知識中，聚醣的長度和乙酰化比例的關鍵信息仍然不清楚，這方面的知識缺少系統化的整理。在此我們開發了一種透過使用n + 2合成策略來有效率的延伸PNAG聚醣並控制長度，以及透過控制使用醋酸酐的當量來做為

模擬部分乙酰化的結果。這些合成的PNAG聚醣分別進行與載體蛋白結合作為疫苗進行小鼠免疫以及使用在醣晶片的生產上作為確定免疫誘導出的抗體效價。最後結合抗體效價分析和巨噬細胞吞噬作用（OPK）的測定結果，提出適合用於發展對抗細菌生物膜多醣PNAG的多醣長度及其部分乙酰化比例的比較結果。