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Spermidine調控發育中爪蟾神經-肌突觸自發性神經傳遞物質釋放之研究

為了解決Fitzpatrick skin typ的問題，作者錢宥任 這樣論述：

Spermidine是一在細胞中常見的物質，它與它的前軀物putrescine以及經由spermine synthase代謝轉化成的spermine均是細胞內常見的polyamines，雖然這些polyamines參與細胞內生理反應已有許多文獻報告，然而spermidine在神經細胞發育的過程中所扮演的角色尚不是很清楚。我們主要以爪蟾(Xenopus laevis)之運動神經細胞與肌細胞混合培養(nerve muscle co-culture)為動物模型，以whole-cell patch clamp的電生理記錄方式來探討spermidine影響神經釋放神經傳遞物質的分子機制。Spermid

ine (330 μM)對突觸前神經傳遞物質的自發性釋放作用(spontaneous synaptic currents; SSCs)在經過約40分鐘的延遲後有明顯促進神經傳遞物質釋放頻率的作用，增加spermidine的濃度可發現延遲的時間縮短且作用的效率增加，顯示spermidine對神經延遲後促進傳遞物質釋放的作用具濃度作用的效應。在後續的分析中發現，在spermidine加藥前後傳遞物質釋放的震幅(amplitude)的累積頻率曲線分析並無顯著差異，顯示spermidine的作用是經由促進神經突觸前釋放傳遞物質的頻率，與突觸後接受器的敏感度無關。神經釋放傳遞物質的過程與神經末梢中鈣離子

濃度的升高有很大的關係，而細胞內鈣離子濃度的升高來源大略分為細胞外鈣離子經由膜上的鈣離子通道流入或由細胞內鈣離子儲存池釋出。我們設計了一系列實驗釐清鈣離子的來源，實驗結果顯示先以細胞內鈣離子儲存池排空劑TG (Thapsigargin)，在細胞內鈣離子缺乏的情況下觀察發現能使spermidine的作用受抑制。此外，為更一步確認spermidine造成細胞內鈣離子濃度上升是經由何種通道流出，我們利用鈣離子儲存池上的鈣離子通道阻斷劑TMB-8 (Ryanodine receptor inhibitor)，實驗結果顯示TMB-8能夠顯著抑制spermidine促進神經釋傳遞物質的作用。為確認鈣離子在

spermidine誘導傳遞物質釋放增加的過程中是否扮演重要角色，並釐清鈣離子上升的來源，我們將細胞的培養液換成不含鈣離子(Ca2+ free)的培養液並觀察是否影響spermidine促進神經傳遞物質釋放的作用，結果發現spermidine促進神經傳遞物質釋放的作用被抑制了。因此我們認為spermidine造成神經傳遞物質釋放頻率增加的作用應該是藉外鈣 (Trigger Ca2+) 進入細胞質協助細胞內儲存池鈣釋放鈣離子所導致的 (calcium-induced calcium release, CICR)。為確認細胞外鈣離子的來源，我們利用以細胞膜Acid-sensing ion chan

nel (ASIC) 的通道阻斷劑Psalmotoxin (PcTx-1) 以及鎳離子進行實驗，結果顯示Psalmotoxin (PcTx-1) 與鎳離子能夠顯著抑制spermidine促進神經釋傳遞物質的作用。為進一步證實細胞外鈣離子流入對spermidine作用的重要性，以及鈣離子流入與spermidine的作用目標之一calcium-sensoring receptor (CaSR)是否有關，我們將CaSR的抑制劑NPS 2143加入培養液中，觀察此情況下是否會影響spermidine對神經釋放傳遞物質的促進作用，結果發現spermidine促進傳遞物質釋放的作用受到抑制。有趣的是單獨加

入NPS2143會影響本身具有高釋放頻率的神經突觸，顯示內生性spermidine對於發育過程中神經活性的調節具有重要的地位。為了進一步了解spermidine在神經生長過程所扮演的角色，在培養4小時後的culture中加入spermidine置於隔天(1-day pretreatment)，觀察其神經細胞形態以及數量，發現加入spermidine後的神經細胞存活率以及與肌肉細胞形成突觸的比例上升，此作用會因加入NPS2143而逆轉，然而細胞的型態如突觸分支數量或細胞體面積則沒有顯著的差異。另外以電生理紀錄方式來評估對神經活性的影響發現，spermidine處理一天後神經傳遞物質釋放增加，但若

NPS2143與spermidine同時存在則會觀察到spermidine促進傳遞物質釋放的作用被抑制了。綜合以上發現，我們的研究結果證實spermidine可以藉由ASIC以及CaSR開啟細胞內鈣離子儲存池上的ryanodine receptor影響發育中神經細胞的生長並促進神經細胞神經傳遞物質的釋放。

扁桃斑鳩菊對皮膚功效之評估

為了解決Fitzpatrick skin typ的問題，作者王筱萱 這樣論述：

扁桃斑鳩菊(Vernonia amygdalina Delile)，又名南非葉，主要用來改善腸胃問題。雖然扁桃斑鳩菊在世界各地廣泛的被使用，但是相關的研究論文報告卻非常少，更不用說是在美白抗老化的研究探討。本研究利用2種細胞模式驗證扁桃斑鳩菊水萃取物的抗色素沉著與促進皮膚膠原蛋白生成的功效。我們利用黑色素瘤細胞模式研究扁桃斑鳩菊水萃取物對黑色素瘤細胞的毒性及抑制黑色素合成的效果。另在正常皮膚纖維母細胞模式下，探討扁桃斑鳩菊水萃取物是否對正常皮膚纖維母細胞有皮膚抗老化的影響及其可能作用機制。研究結果發現扁桃斑鳩菊水萃取物對細胞無顯著性傷害，且扁桃斑鳩菊水萃取物可有效的抑制黑色素的生成。在正常皮

膚纖維母細胞中，當扁桃斑鳩菊水萃取物濃度上升，其細胞膠原蛋白的含量也隨之增加。因此我們認為扁桃斑鳩菊應是具有潛力的作為美白和抗老化功效的原料之一。未來可進一步深入探討扁桃斑鳩菊水萃取物的作用機制及其有效成分，並可應用於皮膚保健的面膜或保養品上。